Kromatografi: Perbedaan antara revisi

'''Kromatografi''' adalah suatu teknik pemisahan [[molekul]] berdasarkan perbedaan pola pergerakan antara fase gerak dan fase diam untuk memisahkan komponen (berupa molekul) yang berada pada larutan.<ref name="McKay"></ref>. Molekul yang terlarut dalam fase gerak, akan melewati kolom yang merupakan fase diam.<ref name="McKay">McKay P. 2010. An Introduction to Chromatography [terhubung berkala]. http://www.accessexcellence.org/LC/SS/chromatography_background.php [21 Apr 2010].</ref>. Molekul yang memiliki ikatan yang kuat dengan kolom akan cenderung bergerak lebih lambat dibanding molekul yang berikatan lemah.<ref name="Tissue"></ref>. Dengan ini, berbagai macam tipe molekul dapat dipisahkan berdasarkan pergerakan pada kolom.<ref name="Tissue">Tissue BM. 2000. Chromatography. [terhubung berkala]. http://www.files.chem.vt.edu/chem-ed/sep/chromato.html [21 Apr 2010].</ref>.

Setelah komponen terelusi dari kolom, komponen tersebut dapat dianalisa dengan menggunakan [[detektor]] atau dapat dikumpulkan untuk analisa lebih lanjut.<ref name="Tissue"></ref>. Beberapa alat-alat analitik dapat digabungkan dengan metode pemisahan untuk analisis secara ''on-line'' (''on-line analysis'') seperti: penggabungan kromatografi gas (''gas chromatography'') dan kromatografi cair (''liquid chromatography'') dengan ''mass spectrometry'' (GC-MS dan LC-MS), ''Fourier-transform infrared spectroscopy'' (GC-FTIR), dan ''diode-array'' UV-VIS (HPLC-UV-VIS).<ref name="Tissue"></ref>.

Kromatografi cair merupakan teknik yang tepat untuk memisahkan [[ion]] atau [[molekul]] yang terlarut dalam suatu larutan. Jika larutan sampel berinteraksi dengan fase stasioner, maka molekul-molekul didalamnya berinteraksi dengan fase stasioner; namun interaksinya berbeda dikarenakan perbedaan daya serap (''adsorption''), pertukaran ion (''ion exchange''), partisi (''partitioning''), atau ukuran. Perbedaan ini membuat komponen terpisah satu dengan yang lain dan dapat dilihat perbedaannya dari lamanya waktu transit komponen tersebut melewati kolom .<ref name="BM">Tissue BM. 2000. Liquid Chromatography (LC). [terhubung berkala]. http://www.files.chem.vt.edu/chem-ed/sep/lc/lc.html [21 Apr 2010]</ref>. Terdapat beberapa jenis kromatografi cair, diantaranya: ''reverse phase chromatography'', ''High Performance Liquid Chromatography'' (HPLC), ''size exclusion chromatography'', serta ''supercritical fluid chromatography'' .<ref name="LC">Carrier R, Bordanaro J, Yip K. 1997. Liquid Chromatography [terhubung berkala]. http://www.rpi.edu/dept/chem-eng/Biotech-Environ/CHROMO/chromliquid.html [6 Mei 2010]</ref>.

''Reverse phase chromatography'' merupakan alat analitikal yang kuat dengan memadukan sifat [[hidrofobik]] serta rendahnya [[polaritas]] fase stasioner yang terikat secara kimia pada padatan [[inert]] seperti [[silika]].<ref name="LC"/>. Metode ini biasa digunakan untuk proses ekstraksi dan pemisahan senyawa yang tidak mudah menguap (''non-volatile'').<ref name="LC"/>.

''High performance liquid chromatography'' (HPLC) mempunyai prinsip yang mirip dengan ''reverse phase''.<ref name="LC"/>. Hanya saja dalam metode ini, digunakan tekanan dan kecepatan yang tinggi.<ref name="LC"/>. Kolom yang digunakan dalam HPLC lebih pendek dan berdiameter kecil, namun dapat menghasilkan beberapa tingkatan equilibrium dalam jumlah besar.<ref name="LC"/>.

''Size exclusion chromatography'', atau yang dikenal juga dengan ''gel permeation'' atau ''filtration chromatography'' biasa digunakan untuk memisahkan dan memurnikan protein.<ref name="LC"/>. Metode ini tidak melibatkan berbagai macam penyerapan dan sangat cepat.<ref name="LC"/>. Perangkat kromatografi berupa gel berpori yang dapat memisahkan molekul besar dan molekul kecil.<ref name="LC"/>. Molekul besar akan terelusi terlebih dahulu karena molekul tersebut tidak dapat penetrasi pada pori-pori.<ref name="LC"/>.

Kromatografi pertukaran ion (''ion-exchange chromatography'') biasa digukanan untuk pemurnian materi biologis, seperti [[asam amino]], [[peptida]], [[protein]].<ref name="Buzzle">Hargreaves S. 2010. Types of Chromatography. [terhubung berkala]. http://www.buzzle.com/articles/types-of-chromatography.html [6 Mei 2010].</ref><ref name="Carrier"/>. Metode ini dapat dilakukan dalam dua tipe, yaitu dalam kolom maupun ruang datar (planar).<ref name="Buzzle"/>. Terdapat dua tipe pertukaran ion, yaitu pertukaran [[kation]] (''cation exchange'') dan pertukaran [[anion]] (''anion exchange'').<ref name="Carrier"/>. Pada pertukaran kation, fase stasioner bermuatan [[negatif]]; sedangkan pada pertukaran anion, fase stasioner bermuatan [[positif]].<ref name="Carrier"/>. Molekul bermuatan yang berada pada fase cair akan melewati kolom.<ref name="Carrier"/>. Jika muatan pada molekul sama dengan kolom, maka molekul tersebut akan terelusi.<ref name="Carrier"/>. Namun jika muatan pada molekul tidak sama dengan kolom, makan molekul tersebut akan membentuk [[ikatan ionik]] dengan kolom.<ref name="Carrier"/>. Untuk mengelusi molekul yang menempel pada kolom diperlukan penambahan larutan dengan [[pH]] dan kekuatan ionik tertentu.<ref name="Carrier"/>. Pemisahan dengan metode ini sangat selektif dan karena biaya untuk menjalankan metode ini murah serta kapasitasnya tinggi, maka metode ini biasa digunakan pada awal proses keseluruhan.<ref name ="Carrier">Carrier R, Bordanaro J, Yip K. 1997. Ion Exchange Chromatography [terhubung berkala]. http://www.rpi.edu/dept/chem-eng/Biotech-Environ/CHROMO/chromion.html [6 Mei 2010].</ref>.